宾夕法尼亚大学佩雷尔曼医学院(Perelman School of Medicine)的研究人员在一项临床前研究中重点研究了一种新的方法，这种方法可以提供“一击两击”来帮助T细胞攻击实体肿瘤。发表在《美国国家科学院院刊》(PNAS)上的研究结果表明，靶向两种控制炎症相关基因功能的调节因子，可使模型中的T细胞扩增至少增加10倍，从而提高抗肿瘤免疫活性和持久性。

CAR - T细胞疗法由宾夕法尼亚大学医学博士Carl H. June首创，他是宾夕法尼亚大学免疫疗法Richard W. Vague教授，也是艾布拉姆森癌症中心细胞免疫治疗中心(CCI)主任，他的工作导致了2017年首个批准的b细胞急性淋巴细胞白血病CAR - T细胞疗法。从那时起，个性化细胞疗法彻底改变了血癌治疗，但对肺癌和乳腺癌等实体肿瘤仍然顽固无效。

CAR - T细胞治疗实体肿瘤面临的挑战之一是一种被称为T细胞衰竭的现象，即来自肿瘤细胞的固体团块的持续抗原暴露使T细胞磨损到无法产生抗肿瘤反应的程度。从患者身上提取已经耗尽的T细胞进行CAR - T细胞治疗，结果产生的产品效果较差，因为T细胞繁殖不足，也不能记住它们的任务。

先前的观察性研究暗示，炎症调节因子Regnase-1是间接克服T细胞衰竭影响的潜在靶标，因为当T细胞被破坏时，Regnase-1会引起过度炎症，从而使T细胞恢复活力，产生抗肿瘤反应。该研究小组，包括主要作者David Mai，工程与应用科学学院的生物工程研究生，以及共同通讯作者Neil Sheppard博士，CCI T细胞工程实验室负责人，假设同时靶向相关但独立的Roquin-1调节因子可以进一步提高反应。

“这两个调节基因中的每一个都与限制T细胞炎症反应有关，但我们发现，将它们一起破坏比单独破坏它们产生更大的抗癌效果，”Mai说。“在先前研究的基础上，我们开始接近在实体肿瘤领域似乎有希望的策略。”

该团队使用CRISPR-Cas9基因编辑技术，在健康供体T细胞中分别和一起敲除Regnase-1和Roquin-1，这些T细胞具有两种不同的免疫受体，目前正在I期临床试验中进行研究:靶向间皮素的M5 CAR (mesoCAR)和靶向ny - eso -1的8F TCR (NYESO TCR)。由于CD19抗原不存在于实体瘤中，因此这两种工程化T细胞产品都不能靶向CD19，而CD19是大多数CAR - T细胞疗法所靶向的抗原。

在CRISPR编辑之后，将T细胞扩增并注入实体瘤小鼠模型中，研究人员观察到，与单独禁用Regnase-1相比，双敲除导致至少10倍的工程化T细胞，并且增加了抗肿瘤免疫活性和工程化T细胞的寿命。在一些小鼠中，它还会导致淋巴细胞的过度产生，从而引起毒性。

“CRISPR是一种有用的工具，可以完全消除Regnase和Roquin等靶基因的表达，从而产生明确的表型，然而，要将这项工作转化为临床环境，还需要考虑其他策略，例如条件基因调控的形式，”Sheppard说。“我们对敲除这两种非冗余蛋白所释放的抗肿瘤效力印象深刻。在实体肿瘤研究中，我们经常看到CAR - T细胞的有限扩张，但如果我们能够使每个T细胞更有效，并复制它们到更多的数量，我们预计T细胞疗法在攻击实体肿瘤方面有更好的机会。”

其他作者包括Omar Johnson, Jordan Reff, Ting-Jia Fan和John Scholler。这项研究得到了美国国立卫生研究院(1P01CA214278, R01CA226983)、帕克癌症免疫治疗研究所、爱默生集体、方丹奖学金、诺曼和塞尔玛克朗研究奖学金以及罗伯特伍德约翰逊基金会卫生政策研究学者的支持。